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为什么要提取质粒
质粒提取
的原理和步骤
答:
如果只用SDS当然也能
抽提
得到少量
质粒
,因为SDS也是碱性的,只是弱了点而已。很多人对NaOH的作用误以为是为了让基因组DNA变性,以便沉淀,这是由于没有正确理解一些书上的有关DNA变性复性的描述所导致。有人不禁要问,既然是NaOH溶解的细胞,那
为什么要
加SDS呢?那是为下一步操作做的铺垫。这一步要记住两点:第一,时间...
质粒提取
的注意事项
答:
质粒
小提主要用于用于大肠杆菌中质粒DNA的小量
提取
,获得的质粒可以用于常规的载体构建,一般适用于5ml以下菌液。而质粒中提,在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素,获得的质粒可以用于细胞转染,常规
需要
菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同,可一次
抽提
100ml-300ml菌液获得大量质粒。
...然后直接
提取质粒
就可以?怎么确是我的表达载体质粒
答:
不对,通过转化到感受态细菌中,不是细胞。感受态的大肠杆菌,可以自己制作也可以通过购买。之后将细菌凃到含有抗生素的板子上,长出克隆后挑取单克隆,将单克隆加入含有抗生素的细菌培养基中培养,之后
提取质粒
,提取质粒可以购买相应的试剂盒,按照试剂盒的说明书操作即可。质粒是带有抗性基因的,只有含有该...
质粒
如何
提取
答:
实验室用公司试剂盒
提取质粒
,一般采用的是碱裂解法。比如从大肠杆菌的菌液中提取,基本原理是先加入rna酶,把rna去掉,然后用碱裂解菌体,用酸平衡,并且sds和蛋白质结合形成沉淀,顺便把与蛋白结合的基因组dna沉淀下来。最后上清中含有质粒dna,把它过柱洗脱下来溶到水中就完成了质粒的提取。
质粒
的小量
提取
和大量提取的目的有
什么
不同?谢谢。
答:
这里有两种情况大提:1,
质粒
本身拷贝数低,
需要
大量
提取
,才能用以载体构建,比如pBI121 2,已经构建好的质粒载体,需要大量转化质粒DNA。一般情况下均为小提,做酶切鉴定或PCR足够。
质粒提取
答:
培养到对数期,或是长一点也可以,比如以百分之一体积接菌,培养12-18个小时都是可以的,没有特别严格的限制。
提取质粒
溶解细菌
为什么
用强酸
答:
质粒
具有高的稳定性,能够有效的耐得住强酸的腐蚀而不改变结构,而细菌细胞壁和细胞膜会在酸作用下瓦解,更有利于质粒的释放。
手动
提取质粒
和试剂盒提取质粒的区别
答:
方便、节省时间。1、方便。手动
提取
程序复杂,工序多,试剂盒提取自动化,简单便捷。2、节省时间。试剂盒提取比手动提取节省50%的时间。
【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却
什么
都没有?
答:
我觉得菌落PCR效果很好,虽然有假阳性的可能,但是只要是做出来,有目的条带一般是对的,你
为什么还要
用菌液做PCR?你还不如摇菌后
提取质粒
然后用质粒PCR或者酶切。既然你说到这个问题了,我觉得很有可能是你的质粒被稀释了,因为在菌落中的浓度比较大。另外也有可能是你根本就没有挑到正确的菌落来摇...
在用碱裂解法
提取质粒
的过程中除质粒以外的DNA和RNA是怎么除去的_百度...
答:
RNA 对碱不稳定,在
提取质粒
时,RNA都降解成小片段,质粒电泳时跑在最前面的就是RNA条带。
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