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western用标准蛋白造假
伪造WB条带可以被看出来吗
答:
可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应,比如说100KD的蛋白你用12%的胶跑,或者说20KD的蛋白你用6%的胶跑。
蛋白质
免疫印迹法 (
Western
Blot ) ,简称WB ,是指通过SDS-PAGE胶将不同分子量的蛋白质分离开,然后将目标蛋白转移到载体(PVDF)膜上,利用抗原抗体的特异性结合,用特异性的一抗结合目标...
伪造WB条带可以被看出来吗
答:
1. 伪造
Western
Blot条带是否容易被识别?答案是肯定的。如果在制备过程中,牛奶没有完全溶解,其中的不溶性颗粒可能会附着在膜上,导致在发光时出现黑点。因此,在牛奶溶解后,建议静置一会儿,并小心吸取上层牛奶进行封闭。封闭完成后,一定要进行三次洗涤,然后再加入一抗。2.
蛋白
分子量偏高或偏低的...
“玄学”实验-
Western
blot的内参你选对了吗?
答:
在
Western
blot实验中,内参的重要性不言而喻。首先,内参通常指的是那些在个体生长过程中稳定表达,不受环境影响,且在大部分组织中持续存在的管家基因表达产物,如β-actin、GAPDH和tubulin等。其主要作用是
标准化
实验结果,因为不同样品的
蛋白质
总量可能存在差异,这可能会干扰我们对目标蛋白表达变化的准...
Western
Blot为什么必须要用内参
答:
内参是最容易被忽略的一项。我们知道,要用
Western
Blot比较不同条件下或者不同组织中,目的
蛋白
表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础。特别表达量不高时,上样量的差别就很可能影响结果的分析。所以你需要内参。内参即是内部参照(InternalControl),对于哺乳动物细胞表达来说一般...
Western
blotting实验完整流程-从
蛋白
提取到出结果
答:
p > 另一种提
蛋白
试剂,
使用
RIPA缓冲液(Gibco)+ 1% cOmplete™,EDTA-free蛋白酶抑制剂(Sigma),对20 mg样本进行提取。p > 蛋白定量使用BCA测定方法(酶标板操作),确保不同样品的总蛋白表达量及蛋白组分一致性。BSA
标准
品需用PBS稀释液稀释至合适浓度,总体积为20 μL。根据样品数量,...
做好
western
blot需要注意各种细节,转给需要的你!
答:
做好
Western
需要注意各种细节。工欲善其事,必先利其器,首先还是从
蛋白
提取开始谈起。 1.收样前3min先配制细胞裂解液(现配现用),RIPA:蛋白酶抑制剂:磷酸酶抑制剂=99:1:1。6孔板收集蛋白每孔需200ul,计算用量。以收集六孔蛋白为例,按比例加入RIPA 1200ul,蛋白酶抑制剂12ul,磷酸酶抑制剂12ul,混匀后置于冰上...
western
blot总
蛋白
定量必要吗
答:
总
蛋白
定量是
标准
程序.由于跑胶的时候每个点样孔,每个跑道有一定的容量,加多了会堵塞,加太少则有可能检测不到,造成假阴性。所以有必要对总蛋白量有所控制。但是对有经验的人士来说,做到适量的加样确实不需要分光光度计测量那种精度。是否有必要定量还是取决于实验的目的。比如,如果不能够定量显示...
蛋白
marker为什么能作为显色条带
答:
蛋白marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子量
蛋白标准
、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。在
western
Blot过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个
Western
Blot参照家族的一员的...
做实验 | 选对
Western
Blot内参抗体,实验成功一半!
答:
在
Western
Blot实验中,内参抗体作为
标准
参照物的重要性不言而喻。它们是衡量目的
蛋白
表达量的关键,通常选择表达稳定、不受外界因素影响的管家基因蛋白,例如β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B等。选择内参的目的是为了校正可能存在的样本处理误差,通过比较目的蛋白与内参蛋白的相对含量,确保实验结果的...
纯化后的
蛋白
做
western
,出现很明显的两条带,请问是二聚体吗
答:
煮沸时间不够使得
蛋白质
变性不充分或者形成二聚体会导致实验效果不好,煮过头的情况我也没有遇到过(貌似还没有碰到人煮个5-10分钟还会煮成一小时的- -|||),不过肯定的是变性已经充分.可以试一试,当然也有可能蛋白质长时间高温沸水作用下部分降解.
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