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wb蛋白放几度
请教:检测
蛋白
时PCR和Western意义比较
答:
WB
测
蛋白
OD值定量WB需要摸条件数失败另外WB需要markB-action 价钱比较贵
做
wb
实验时为什么要用脱脂奶粉的tbst封闭转移膜两小时
答:
封闭的概念是,首先pvdf膜与所有
蛋白
是有很强的结合力,包括抗体,蛋白电泳转膜后,pvdf膜上会结合分离的蛋白,但这些蛋白的数量比较少,不足以饱和膜上所有的蛋白结合位点,如果不封闭直接孵育抗体,抗体就会与这些位点结合,所以需要用杂蛋白封闭膜上的空余位点。封闭相当于在膜上覆盖一层蛋白,这样抗体与...
用western blot做磷酸化
蛋白
的测定需要注意哪些问题
答:
关键要加磷酸酶的抑制剂,如NaF,NaVO3等。可参看abcam的磷酸化
蛋白WB
protocol 参考网址on http://www.bio1000.com/experiment/protein/290585.html
蛋白
杂交尼龙膜如何使用
答:
背景问题尤为突出(据分子克隆III说通过热处理的酪蛋白和1%聚乙烯吡咯烷酮延长封闭时间可以改善),而且当转移缓冲液中存在有SDS时
蛋白质
就容易从尼龙膜上泄漏(通过甲醛固定可以缓解这一情况)。另外至今也没有适合尼龙膜上的直接染色方法。因此在许多情况下实验室人员进行
WB
实验不选择尼龙膜。
蛋白质
体外降解有规律可寻吗
答:
一般来说,大分子
蛋白
更容易降解,但也不一定.蛋白的降解应该是随机的,以前听到一句话说,就象有的人断头,有的人断胳臂,挺有道理的.
WB
图表现为目的条带附近有很多模糊的带.
wb
跑胶时是小分子量
蛋白
先跑出吗
答:
是的。
wb
跑胶时是小分子量蛋白先跑出去,其他分子紧跟其后。
蛋白质
(protein)是组成人体一切细胞、组织的重要成分。机体所有重要的组成部分都需要有蛋白质的参与。一般说,蛋白质约占人体全部质量的18%,最重要的还是其与生命现象有关。
用western 检测磷酸化
蛋白
为什么要做一个去磷酸化得对照?
答:
那个不是去磷酸化的,是总的
蛋白
,包括磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白。因为普遍意义上认为,蛋白的磷酸化激活是体内磷酸化蛋白占有总的该蛋白的百分比上升,所以在做
WB
时,通常除了做一个磷酸化蛋白的含量表达变化外,还做一个总的蛋白,用以 说明,这个磷酸化蛋白的改变并不是因为总的该蛋白表达的变化而...
如何确定我生产的
蛋白
是我要的蛋白呀
答:
方法如下:1、进行蛋白序列检测。2、先用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量,再跟标准的比对一下,如果有标准样,可以和提取出的
蛋白质
在一块凝胶上电泳,看迁移值是否一样。3、通过
WB
进行鉴定。4、通过蛋白电泳观察条带对应的分子量大小是否与目的蛋白一样。
肝组织怎么做ELISA??和做
WB
提
蛋白
一样吗??
答:
这个不一样的。ELISA相对来说要简单一些,订一个试剂盒,而组织处理的话,用PBS研磨,离心取上清就OK了。一般不用
蛋白
提取试剂,蛋白须保持天然结构。不可变性(除非试剂盒有特别说明)
好物好推荐:内参抗体!
答:
※不适合用于检测30kDa-40kDa大小目标
蛋白
的
WB
实验中。在某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,也不适合做内参。2)β-Actin内参抗体 Actin即肌动蛋白,是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin大致可分为六种,其中四种是不同肌肉组织特异性的,其余两种广泛分布于各种组织中,包括β-...
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