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wb一次上样3遍算重复吗
western蛋白样品最多可以反复冻融几次?
答:
可反复冻融的次数具体情况根据目的蛋白性质(主要是稳定性)而定
,当然,最好是一次成功。如果说需要做大量的实验,需要一次准备很多一致性蛋白样品,那么强烈建议你在第一次冷冻前用EP管分装,分装数量和分装量根据你的实验次数和需要一次上样量确定。这样,就完全避免了多次冻融(除了第一次实验不需要冻...
wb上样
顺序有要求吗
答:
wb上样
顺序的要求是根据蛋白表达丰度调整蛋白上样量,尽量保证每孔上样量保持一致。wb首先要设计上样的顺序,一般是让与抗体有反应的样品和没有反应的样品间隔开,这样条带之间反差比较明显。根据蛋白表达丰度调整蛋白上样量,尽量保证每孔上样量保持一致。比如你的检测样能够与抗体反应,上样就是maker、...
同一个样本两次蛋白制样有差异吗
答:
有,在做蛋白提取实验中,也许有的同学都会提出这样的疑问:每次提蛋白后会将样品在短时间内
重复
2-
3
次
WB
,但是每次跑出的条带趋势不一致,
上样
量和其他条件都没有变,内参基本是整齐稳定的,不知道为什么目的条带就是不一致?这是什么原因呢?影响因素太多了,实验中的任何任何一个步骤稍微有点差异都...
急切求解
WB
,IHC的意思!
答:
而多抗能与抗原上的多种抗原决定簇结合,所以特异性较差,较易引起交叉反应。 4.
重复
性。单抗的重复性好,而多抗每批都不一样。 5. 沉淀反应。多抗由于与抗原多价结合容易形成网络样沉淀,而单抗只与抗原结合产生二聚体,不能直接形成抗原抗体沉淀物。抗体的保存: 抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成,常用的...
做好westernblot需要注意各种细节,转给需要的你!
答:
2.弃掉旧的培养基,PBS洗
三遍
。 3.每孔加入200ul刚配好的裂解液,立即置于冰上,在摇床上裂解30min。 (全程在冰上操作) 1.将动物组织(脑、肺等)取出后分装成三份或更多(一份
WB
,一份qPCR,一份备用),取出后立即存于-80℃。(注:取完一块组织后立即冻存于-80℃,反复冻存样品对待测蛋白有影响,最好用新...
wb
实验是什么实验?要怎么做呢?
答:
wb
的实验步骤 制样:裂解缓冲液或者超声处理。(使用RIPA裂解液是需按照100:1加入蛋白酶抑制剂)。电泳:根据蛋白大小确定合适的PAGE胶浓度,推荐
上样
量为20-30ug总蛋白。转膜:湿转和半干转都可。但在待检测蛋白分子量较大或低内源水平湿转移方法更佳。洗膜:10min/次*3次。封闭:含5%脱脂奶粉的TBST中...
wb
一块胶可以上两个一样的样品吗
答:
6.
上样
的总量是一定的,可以是30ug,也可以是50ug,这个值可以通过曝光后条带的颜色深浅来改变总量的多少。上样体积就是上样总量÷上样浓度,这样就算出来每组样品需要加多少ul的上样体积跑胶啦。还有一点要注意的是,如果样品的浓度很低,测出来的体积就会大,因为一个梳子孔最多能注入25ul,尽量不...
wb
的图片内参可以
重复
用吗
答:
wb
的图片内参可以
重复
用。校正蛋白样品定量以及
上样
过程中的误差,保证实验结果的准确性。
wb
15孔板
上样
量一般多少
答:
WB
15孔板的样量在1%至5%之间。WB15孔板是一种差压流量仪表,其原理是通过孔板前后的差压值来
计算
流量,为了获得较准确的测量结果,样量保持在一定的范围内,经过实践和理论计算,将样量控制在总流量的1%至5%之间,可以在保证测量精度的同时,减少对流体流动的影响。
wb
调整
上样
量会被看出来吗
答:
会。
wb
调整
上样
量需要测定样品的蛋白浓度,主要目的是对样品进行均一化处理,需要都调整到和最低浓度的那个样本一样的浓度,因此会被看出来。
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