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质粒dna碱裂解法
试述
碱裂解法
提取
质粒
的基本原理及关键试剂?
答:
抽提质粒DNA常用碱裂解法,它是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法
,其基本原理为:在碱性条件(pH12.5)下,线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性,质粒DNA的氢键虽然断裂,但两条互补链彼此缠绕,紧密结合在一起。
分子实验查漏补缺系列:SDS
碱裂解法
制备
质粒DNA
答:
VIII. 加入150微升冰预冷的碱裂解液III,确保溶液在粘稠的细菌裂解物中分散均匀,然后置于冰上3至5分钟
。碱裂解液III中的醋酸用于中和NaOH,避免长时间碱性条件导致DNA断裂,而PDS是水不溶的,导致沉淀。IX. 使用离心机于4℃以最大转速(≥12000g)离心5分钟,收集上清。如有未形成紧密沉淀的情况,可...
碱裂解法
分离提取
质粒DNA
的基本原理是:()
答:
正确答案:A
碱裂解法
提取
质粒
时,试述溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的主要成分及作用原理...
答:
使蛋白质变性而沉淀;④SDS能抑制核酸酶的作用,防止对DNA的降解。(3)溶液Ⅲ的主要成分为KAc(pH4.2)。用pH4.2的KAc溶液是为了调整溶液pH至中性,使变性的
质粒DNA
能够复性,并能稳定存在。而高盐的3mol/L醋酸钾(KAc)有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白质复合物凝聚而沉淀。
用
碱裂解法
提取
质粒DNA
的,加入溶液1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是...
答:
溶液2中的主要成分是NaOH和SDS,是用来
裂解
细胞的。因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙,影响使用效果,因此要现配现用。SDS的话,低温容易产生沉淀。不过在37°C 水浴一下就好。主要还是NaOH的问题。溶液1主要是让菌体细胞充分悬浊于溶液,没有什么实际意义,可以不要。溶液2是碱液,目的在彻底破坏...
碱性
裂解法
提取
质粒DNA
原理是什么?
答:
抽提质粒DNA常用
碱裂解法
,它是一种应用最为广泛的制备
质粒DNA的
方法,其基本原理为:在碱性条件(pH12.5)下,线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性,质粒DNA的氢键虽然断裂,但两条互补链彼此缠绕,紧密结合在一起。当加入乙酸钾恢复至中性时,染色体DNA分子难以复性,而质粒DNA分子很快复性,离心时,...
碱裂解法
提取
质粒dna
的原理是什么?
答:
质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子,重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA 分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA 的提取,本实验采用
碱裂解法
提取质粒DNA。纯化
质粒DNA 的
方法通常是利用了质粒DNA 相对较小及共价闭环两个性质。例如,氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇...
碱裂解法
中哪些步骤或者试剂帮助核酸的沉淀
答:
碱裂解法
是提取质粒的最常用也最有效的方法,是基于染色体DNA与
质粒DNA
的变性与复性的差异达到分离目的.原理:高pH使质粒DNA和染色体DNA变性,同时沉淀蛋白质.再将pH值调至中性,质粒DNA较小,很容易复性成双链.而染色体DNA较大,缠结成网状不溶物质,从而可以通过离心除去.方法:依次加入下面三种溶液:溶液1:...
分子实验查漏补缺系列:SDS
碱裂解法
制备
质粒DNA
答:
本文详细描述了
碱裂解法
的操作和原理,方便在以后的实验中就算用试剂盒也能理解每个步骤的作用,并且对实验中出现的问题进行思考和解决。该实验方案的目的是从少量(1~2mL)细菌培养物中分离
质粒DNA
。DNA产量为100ng~5μg,这取决于质粒的拷贝数。少量的DNA作为体外酶促反应的底物或者模板是足够的,但是...
SDS
碱裂解法
制备
质粒DNA
的具体操作步骤是怎么样的
答:
2.悬浮菌液.用200/250ul
碱
提Ⅰ液(确定已加入RNAse)悬浮沉淀,可在振荡器上振荡悬浮.目的是制成均一菌液.3.蛋白质变性.加入同Ⅰ液等体积Ⅱ液,轻柔颠倒6~8次.动作一定要轻柔,以免扯断
质粒
.4.中和SDS变性作用,沉淀蛋白质及基因组
DNA
.加入Ⅲ液,体积为Ⅰ液的1.2倍.加入后立即上下颠倒6~8次,...
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