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简述碱裂解法提取质粒的原理
碱裂解法提取质粒
答:
一、实验原理:碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA 与线性染色体DNA 在拓扑学上的差异来分离它们
。在pH 值介于12.0 ~12.5 这个狭窄的范围内,线性的DNA 双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA 的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当...
碱性
裂解法提取质粒原理
答:
碱裂解法通常有大量提取法和小量提取法,其提取原理是一样的,只需体积按一定比例扩大
。纯化质粒DNA时通常还利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。开始进行克隆时,对于小量制备的质粒DNA,经过苯酚、氯仿抽提。RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA,所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化...
碱裂解法提取质粒
dna
的原理
是什么?
答:
碱裂解法提取质粒dna的原理是:高PH的溶液会使细胞壁粕类从而使得DNA和蛋白质变性
。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,会使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏,闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离,这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。
碱裂解法提取质粒
dna
的原理
是什么?
答:
其基本原理为:
当菌体在NaOH 和SDS 溶液中裂解时,蛋白质与DNA 发生变性,当加入中和液后, 质粒 DNA 分子能够迅速复性,呈溶解状态
,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA 不变性而呈絮状,离心时可沉淀下来。相关介绍:细菌质粒是一类双链、闭环的DNA,大小范围从1kb 至200kb 以上不等。各种质粒都...
碱裂解法提取质粒
时,试述溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的主要成分及作用
原理
...
答:
溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L,加入溶液Ⅱ后,该系统的pH为12.0~12.6,
因而促使染色体DNA与质粒的变性解离成单链
。SDS是一种阴离子去垢剂,它的主要作用有:①溶解细胞膜上的脂肪与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜;②解聚细胞中的核蛋白,使蛋白质与DNA分开;③SDS能与蛋白质结合成为SDS-蛋白质...
碱裂解法
分离
提取质粒
DNA的基本
原理
是:()
答:
碱裂解法
分离
提取质粒
DNA的基本
原理
是:()A.碱性条件下染色体DNA变性,去除变性条件后,可以复性;而质粒DNA则相反。B.碱性条件下质粒DNA变性,去除变性条件后,可以复性;而染色体DNA则相反。正确答案:A
碱裂解法提取质粒
DNA中哪些因素影响核酸的沉淀?
答:
碱裂解法提取质粒
DNA中温度和湿度会影响核酸的沉淀。碱裂解法提取质粒dna中高PH的溶液会使细胞壁粕类从而使得DNA和蛋白质变性。细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,会使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。碱裂解法
的原理
:当菌体在NaOH 和SDS 溶液中裂解时,蛋白质与...
碱法
分离
质粒
DNA
的原理
是什么?
答:
现在
质粒提取
无论手提还是试剂盒,其根本
原理
大多还是
碱裂解法
:当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变性 而呈絮状,离心时可沉淀下来。进一步的质粒DNA获取,手提是经过苯酚、氯仿
抽提
,...
抽提质粒的
基本
原理是什么
答:
碱裂解法
:溶液I的作用 首先要控制好Tris-HCl溶液的pH和浓度;50 mM葡萄糖使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。因此,如果溶液I中缺了葡萄糖实对
质粒的抽提
本身而言,几乎没有任何影响。在溶液I中加入高达 10 mM 的EDTA,是要把大肠杆菌细胞中的Ca2+和Mg2+等所有二价金属离子都螯合掉,...
用
碱裂解法提取质粒
DNA,为什么不会得到线形DNA?
答:
因为真核细胞DNA上有蛋白质结合,如果用碱裂解法就会把DNA与蛋白质一起沉淀
碱裂解法提取质粒
DNA,
原理
是细胞内蛋白质在沉淀的过程中会把大的DNA分子一
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