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提取rna时加DNase
trizol方法
提取RNA过程中
哪一步
加DNase
处理
答:
一是在trizol分层,取得上清层后,即进行
DNase
处理,处理过后再加异丙醇析出 二是在完全结束
抽提
过程,已得到
RNA
水溶液后,再加DNase进行处理 我们现在偏向使用第二种,因为第二种可以在测量得RNA浓度之后,按比例决定DNase用量,所以又能够保证DNA消化完全,又不会过量。
提取RNA
后需要用
DNase
处理吗?如果用的话,怎么处理,会影响RNA的质量吗...
答:
如果你
RNA提取
结束后电泳发现有DNA带,那么你就需要用
DNase
消化.有市售的RNase free的重组
DNase
买,按照说明书操作就OK.如果你RNA提取结束后电泳发现没有DNA带,是不需要消化的.当然,如果非常严格的操作要求,即使你电泳看不到DNA带,也要用DNase消化后进行下一步实验.另外,DNase消化是不会影响RNA质量的.
在
提取
的
RNA中加入DNase
后如何灭活DNase
答:
一般两种办法,首先是每50ul体系
中加入
2ul 0.5M的EDTA然后80度水浴2分钟。另外一种是将50ul体系稀释到100ul然后加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)混匀后12000rpm室温离心5min转上清,然后再加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),混匀后12000rpm室温离心5min,转上清。在上清中加入10ul 3M的醋酸...
提取RNA
后需要用
DNase
处理吗
答:
如果你
RNA提取
结束后电泳发现有
DNA
带,那么你就需要用
DNase
消化。如果你RNA提取结束后电泳发现没有DNA带,是不需要消化的.当然,如果非常严格的操作要求,即使你电泳看不到DNA带,也要用DNase消化后进行下一步实验.另外,DNase消化是不会影响RNA质量的.
做荧光定量PCR,前期
提取RNA的时候
一定要
加入DNase
I和RNase inhibitor吗...
答:
1.其实反转录要求不是很高,所有器具消毒操作带手套口罩就行,没必要
加RNa
seInhibitor 2.OD260/280实际上反应的是蛋白质杂质的比例,可以间接的反应有没有
RNA
酶污染,所以这个比值低了有可能是RNA酶污染,也可能是
提取
操作或者试剂问题导致蛋白质残留过多。从个人经验来看,做普通跑胶比值要求高一些在1....
我以后是用cDNA做基因表达的差异筛选的,
提取RNA
一定要用
DNase
处理吗...
答:
我认为应该需要用
DNase
处理,DNase处理又不是很难,
提取的时候
就可以
加入
进去的
rna提取
时哪一步是去除DNA的
答:
经典的TRNzol法
中
有一步是
加DNase
的.这就是除DNA的一步.CTAB法中是加入LiCl这一步除去的DNA.氯化锂可以选择性沉淀
RNA
.
trizol方法
提取RNA过程中
哪一步
加DNase
处理
答:
TRIzol,混合后室温放置5分钟,再
加入
196μL氯仿,振动15至30秒,室温放置2至3分钟,以4℃,12 000×g离心15分钟,小心将上层液体转移至新管
中
,加入500μL的异丙醇,轻弹使其混匀,室温放置20分钟,以4℃,12 000×g离心15分钟,此时
RNA
沉淀于管底形成胶状小球,弃掉上清,用75%的乙醇清洗RNA...
酵母细胞基因组
rna
的
提取
答:
酵母细胞基因组RNA的提取一般可以按照以下步骤进行:1.提取细胞总RNA:将酵母细胞收集后用三倍体积的Trizol或RNeasy提取试剂按照说明书操作,可将总
RNA提取
出来。2.消化DNA:将总
RNA加入DNase
消化缓冲液,用DNaseI酶消化,将DNA降解掉。3.纯化RNA:将消化完DNA的RNA取出后,加入等体积的Phenol/Chloroform...
RNA提取过程中
如何去除DNA污染
答:
方法:1、使用DNA酶
DNAse
I 消化1小时,恒温37度。2、离心取上清
的时候
,一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体。3、直接加NaOH溶液与
提取
液混合搅拌,然后离心就可以了.因为
RNA
可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,离心后的上清液就不含有DNA了。
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