66问答网
所有问题
当前搜索:
常用于合成cdna第二链的酶
常用于合成cDNA第二
条
链的酶
是
答:
在DNA重组技术中,
Klenow片段作为DNA聚合酶
,常用于cDNA第二条链的合成和标记双链DNA3′末端。②DNA连接酶可催化DNA中相邻的5′-磷酸基和3′-羟基末端之间形成磷酸二酯键,使DNA切口封闭或使两个DNA片段连接。碱性磷酸酶的功能是切除DNA末端磷酸基。末端转移酶的功能是在3′-羟基末端进行同质多聚物加...
什么是DNA聚合
酶
?
答:
DNA聚合酶Ⅰ的主要用途
:①用切口平移方法标记DNA(可作杂交探针),②利用其5′→3′外切核酸酶活性降解寡核苷酸作为合成cDNA第二链的引物,③用于对DNA分子的3′突出尾进行末端标记,用于DNA序列分析。大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片断(KLENOW):KLENOW片断是用枯草杆菌蛋白酶裂解完整的DNA聚合酶Ⅰ产生,或通过...
什么是klenow
酶
?有哪些活性?在基因工程中有什么作用
答:
用途: 包括用双脱氧末端终止法进行 DNA 序列分析、 用于 cDNA 第二链的合成、 在定点突变中用于合成第二链、 用引物延伸法(primer extension) 制备单链 DNA 探针等。功能 大肠杆菌
DNA聚合酶
Ⅰ的Klenow片段是完整的DNA聚合酶Ⅰ的一个片段,只有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性,失去了5’...
cdna第二
条
链的合成
方法优缺点比较
答:
1、末端转移酶加尾法:优点为避免购买昂贵的第二链合成试剂盒
,更容易在CDNA两端引入不同的已知序列,不会出现两种引物的交叉污染,而缺点为末端转移酶加尾法无法满足任何需求,最佳的策略是根据研究材料和研究问题的特点,结合自己的实际情况,选择合适的方法,构建出满足研究要求的CDNA文库。2、用RNaseH、...
自身引导合成法和置换合成法
合成cDNA第二链的
优缺点是什么?
答:
在完成第一链cDNA合成后,得到的是DNA与RNA的杂交分子。
通过DNA聚合酶的作用
,利用第一链作为模板,开始第二链的合成过程。以下是三种主要方法:1. 自身引导合成法首先,通过变性降解去除杂交分子中的RNA,使得单链cDNA的3'端形成发夹结构作为引物。在大肠杆菌聚合酶I Klenow或反转录酶的作用下,这个引物...
cDNA
构建
答:
2.
cDNA第二链
合成: 可通过两种方法,一种是利用cDNA第一
链的
发夹环作为引物,另一种是RNase H修饰法保留mRNA5'端的顺序。3. cDNA甲基化: 是对
合成的cDNA
进行必要的修饰,可能影响其功能和稳定性。4. 接头连接: cDNA与载体DNA的连接,使用末端转移
酶
、Klenow片段或粘性末端连接技术完成。5. 分离...
简述
cdna
文库构建步骤
答:
阶段1:反转录
酶
催化
合成cDNA第
一链 1.在置于冰上的无菌微量离心管内混合下列试剂进行cDNA第一
链的
合成: poly(A)+RNA (1μg/μl) 10μl 寡核苷酸引物(1μg/μl) 1μl 1mol/L Tris-HCl (pH8.0, 37℃) 2.5μl 1mol/L KCl 3.5μl 250 mmol/L MgCl2
2
μl dNTP溶液(含4种dNTP,每种5...
RACE PCR具体的实验步骤
答:
2. cDNA第二链合成: 此步骤需要使用含有聚合酶、RNaseH和连接酶的混合物,T4
DNA聚合酶
用于填充dscDNA末端。同时,建议进行阳性对照,使用试剂盒中的人类骨骼肌mRNA作为模板。3. cDNA产量检测: 通过电泳分析cDNA的生成量,与对照进行比较,以确定后续步骤中cDNA的稀释比例。4. 接头连接与稀释: 根据提供的...
Klenow片段功能作用
答:
Klenow片段在分子生物学实验中发挥着重要作用,特别是在cDNA的第二链合成过程中。它源于大肠杆菌
DNA聚合酶
Ⅰ,是一种特定的酶活性片段,保留了DNA聚合酶的5'→3'合成和3'→5'外切酶功能,但缺乏5'→3'外切酶的活性。通过提供32P标记的三磷酸核苷酸,Klenow片段能够使DNA分子获得同位素标记,这对于追踪DNA...
求教
cDNA
制备的一般方法 RT,一般的步骤就行,
答:
1、自身引导合成法:单
链cDNA
的3'端能够形成发夹状的结构作为引物,在大肠杆菌聚合
酶
I Klenow或反转录酶的作用下,
合成cDNA的第二链
.缺 点:在以S1核酸酶切割cDNA的发夹状结构时,会导致对应于mRNA 5'端的地方的序列出现缺失和重排.S1核酸酶的纯度不够时,会偶尔破坏合成的双
链cDNA
分子.2、置换合成法 ...
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜
标记双链dna3端的酶
具有合成cdna功能的酶
常用于标记双链DNA3端的酶是
在重组DNA技术中常用到的酶是
促进ATP合酶合成ATP的因素
结合并活化cap
具有降解mRNA功能的有
可以调节基因转录的维生素
脂肪b氧化的限速酶