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如何测定蛋白质的氨基酸序列
请教:
氨基酸序列
的
测定
方法
答:
有两种方法,
一是直接测序列法
,常用Edman降解法,在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸(阿尔发)与PITC反应,标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。肽链中的第一个肽键变弱,在无水酸的存在下发发生降解,第一个氨基酸(AA1)经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。C端氨基酸残基分析,可用;羧基...
如何测量氨基酸
的排列顺序?
答:
测定肽或蛋白质中各氨基酸的排列顺序
在分析氨基酸后下一步就是要测定肽链或蛋白质中氨基酸的结合顺序
,通常可由下列几种方法配合使用分析推测出来: (1)N-端氨基酸单元的分析:最常用的有下列两种方法: (a)桑格尔方法: 详细内容 这项方法首先是桑格尔(Sauger,F.)提出的,他利用氨基很...
如何
确定一个膜
蛋白
胞内域
的氨基酸序列
答:
1、可考察其氨基酸序列,看是否具有跨膜结构域.2、可作脂膜结合实验.但需要纯化相关蛋白.3、用荧光蛋白标记看是否是膜定位.4、细胞匀浆为脂质微体
,观察该蛋白是否结合于脂质微体上.1、一般是以α螺旋穿膜.氨基酸一般是疏水性氨基酸.有网站可以预测.2、这种一般用于具有通道性质的膜结合蛋白.和脂质层结合...
质谱仪是
怎么测蛋白质序列
的,过程是
什么
??
答:
基本过程是将蛋白质被打成单电荷片段,
通过电磁偏转得到一系列长度不等的片段,由于可测得质量,将片段排序,就可知道某个位点的氨基酸的质量
,进而得知氨基酸的种类,重复此过程,可得知所有氨基酸的种类,进而得知蛋白质的序列,一般都是以及序列的信息,毕竟蛋白质测序之前要经过预处理。
蛋白质
测序实验原理及步骤
答:
首先,庞大的
蛋白质
分子需通过非共价键分离,形成寡聚蛋白,如四聚体的血红蛋白和二聚体的烯醇化酶。利用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍等试剂,可以有效地处理这些多肽单元。步骤二:数量
测定
通过
测量氨基酸
残基数与蛋白质分子量的关系,我们可以估算出多肽链的数量,这是确定
序列
的第一步。步骤三:断裂...
胶内酶解后用
什么
方法
测序列
答:
在胶内酶解后,可以使用质谱分析来确定蛋白质的序列。质谱分析是一种通过
测量蛋白质
片段的质量和质量比来确定其序列的方法。常用的质谱分析方法包括MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)和LC-MS/MS(液相色谱-串联质谱)。这些方法可以帮助确定
蛋白质的氨基酸序列
,从而进一步研究蛋白质的结构和...
核酸和
蛋白质序列
分析的内容和方法有哪些
答:
蛋白质的序列结构
测定
:1.到目前为止,最经典的
蛋白质的氨基酸序列
分析方法是,sarI等人基于Edman降解原理研制的液相蛋白质序列仪,及后来发展的固相和气相的蛋白质序列分析仪。2.质谱:早期的质谱电离的方式主要是电子轰击电离(EI),它要求样品的挥发性好,一般与 气相色谱联用。但使用G C/M S分析,肽...
蛋白质
测序的
测定
步骤
答:
1 多肽链的拆分。由多条多肽链组成的蛋白质分子,必须先进行拆分。几条多肽链借助非共价键连接在一起,称为寡聚蛋白质,如,血红蛋白为四聚体,烯醇化酶为二聚体;可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理,即可分开多肽链(亚基).2
测定蛋白质
分子中多肽链的数目。通过测定末端
氨基酸
残基的摩尔数与蛋白...
氨基酸序列测定
方法分析
答:
科学巨擘:质谱法质谱法,如同科学的显微镜,通过
测定氨基酸的
质量或质量比,揭示其身份。在
蛋白质
质谱中,酶如胰蛋白酶将蛋白质分解成微小片段,让串联质谱(MS/MS)技术得以施展,精确揭示
氨基酸的序列
细节,成为当今最强大的分析工具之一。数据库的力量:生物信息学比对当基因代码已经揭示,蛋白质/核酸数据...
蛋白质
N端和C端的
测定
方法是
什么
?基本原理是什么?
答:
B.氰酸盐法:1963年Stank及Smyth介绍了一种
测定
N末端的新方法,步骤如下:由于乙内酰脲氨基酸不带电荷,因此可用离子交换层析法将它与游离氨基酸分开,分离所得的乙内酰脲氨基酸再被盐酸水解,重新生成游离
的氨基酸
,鉴别此氨基酸即可了解N-末端是何种氨基酸。C.二甲基氨基萘磺酰氯法:1956年...
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