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反转录时要去除基因组DNA
【干货】
反转录
FAQ解析
答:
gDNA去除: 虽然能有效清除大部分基因组DNA
,但可能影响荧光定量实验的准确性,需谨慎处理。效率与时间: 虽然延长反应时间可能不会显著影响反转录效率,但对于高GC含量或复杂二级结构的RNA,适当调整可能有益。无反转录对照: 确保没有基因组DNA污染,No RT Control实验是必不可少的,以评估可能的影响。RNA...
遗传方面的,怎么
除去
RNA中
基因组DNA
答:
这个如果你做反转录的话,只能是用PCR检测了
。电泳基本检测不出来。象现在的试剂盒或者TRIZOL提的RNA,除质量太差,一般含基因组很少。 如果RT-PCR发现结果不对,可以用那种不含RNA酶的DNA酶处理一下。 如果引物能避开的话,有点DNA也没关系。
【干货】
反转录
FAQ解析
答:
3. gDNA去除的注意事项:虽然gDNA去除能有效
清除
大部分
基因组DNA
,但可能会影响荧光定量实验的准确性,因此在操作中需要格外小心。4. 无
反转录
对照的必要性:进行No RT Control实验,即无反转录对照实验,是确保实验结果准确性的关键步骤,用于检测基因组DNA的污染情况。5. 滚颂森RNA品质控制:通过电泳分...
做逆转录PCR,扩增出的条带怎样区分是残留
基因组DNA
还是
反转录
得到的cD...
答:
博凌科为-为你解答:
基因组DNA
比CDNA大很多,跑个电泳即可知道。还有做
反转录
之前用DNA酶处理一下,可把基因组DNA消化了。
怎样
除去
RNA中的
基因组DNA
污染
答:
问题。发现
DNA
污染,用DNAse I 消化1小时,37度 离心取上清
的时候
,一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体。直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,离心后的上清液就不含有DNA了。RNA提取步骤:1. 匀浆处理:① 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100...
RT-PCR实验案例解析—钟鼎生物
答:
3.4.1.
基因组DNA去除
采用钟鼎公司的DNase I,在RNase free的离心管中配制如下混合液:3.4.2.
反转录
反应 在PCR管中配制下列反应混合液:65℃反应5 min,冰浴冷却。在第一步的反应管中配制下列反转录反应液:反转录反应条件的设置:30℃ 10 min,42℃ 30 min,95℃ 5 min。冰浴冷却。产物...
...PCR检测
基因
表达的实验步骤及如何判断并消除
DNA
污染所造成的影响...
答:
total RNA的提取 mRNA的
反转录
荧光定量PCR 由于字数限制,详细步骤可以参考下面网址。消除
DNA
污染:按照说明书加入足量的Trizol,细胞过多会引起DNA污染。现在已经有
去除基因组
污染的反转录试剂盒,已经在很多实验室常用。你可以尝试一下。参考资料:http://lovelyresearcher.com/forum.php?mod=viewthread&t...
构建载体为什么要
反转录
从
基因组
不行吗
答:
反转录
获得DNA主要是为了
去除
内含子。原核生物的基因组上没有内含子,因此也可以直接用
基因组DNA
。真核生物的基因大多数都具有内含子,从mRNA反转录可以去除内含子而只获得CDS。也有一些真核生物的基因没有内含子,这种情况下则可以使用基因组。
分离mRNA过程中,如果RNA有
DNA
污染会有影响吗
答:
会有影响。因为提取的RNA有DNA污染,那么
反转录
以后的cDNA也就有
基因组DNA
污染,这样,扩增cDNA。都会出现杂带或非特异性扩增,对实验结果不好。由一个DNA分子,边解旋,边转录。利用细胞核内部的游离核糖核苷酸合成。合成规则遵循碱基互补配对原则。以上过程叫做转录,在细胞核中完成。接着,mRNA穿过核孔。
为什么提取目的基因从CDNA基因组中提取而不从
基因组DNA
中提取
答:
cDNA是
反转录DNA
,主要区别是没有内含子,内含子不参与
基因
表达,又占基因很大部分起分隔作用,对提取目的基因有很大干扰。cDNA是将修饰过,也就是切除内含子的mRNA进行反转录形成的,不含内含子,对提取有用基因提供了方便 谢谢
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