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双酶切两个条带都能用吗
重组质粒
双酶切
鉴定
答:
你看看双酶切后载体的位置有几条带,
如果是两条,那说明酶切不完全,如果是一条,那说明酶切效率没问题
。pET28a分子量为5.6k,你的插入片段为500bp,如果你的质粒完全切开,载体和插入片段的摩尔比为1:1,质量比就是5.6k:0.5k,跑胶后两条带的亮度比就是10:1,所以你目的条带很淡非常正常。
遗传题中
酶切
后电泳为什么只出现一
条带
就只含有A或a
答:
质粒单酶切,如果酶切位点只有一个的话,应该出现的是一
条带
,即为线性质粒DNA。如果有
2个酶切
位点,且酶切位点相距较远,大于100bp以上,可以在凝胶电泳结果中显示2条带(小于100bp的话与质粒基因碱基数目相差太多,可能无法看清条带) 。通常做单
酶切可以
验证酶切位点及线性质粒大小等。通常酶切...
双酶切
后
条带
一亮一暗
答:
为促进
酶切
完全,可以增加酶的用量或延长酶切时间。2、DNA样品质量问题:如果DNA样品存在杂质或降解,会影响酶切效果,导致条带亮度不均一。例如,DNA样品中存在的蛋白等杂质会影响酶的活性,而影响酶切效果。应避免使用降解的DNA样品。3、跑不开或者条带重叠:如果
两条带
合在一块或两条几乎同样大小的...
双酶切
质粒跑电泳出现三
条带
答:
双酶切
质粒跑电泳出现三
条带
太正常了,纯一点浓度高一点的跑胶出来就是3条带,分别是闭合、开环、线性的质粒,如是酶切后的3条,先看一下几个酶切的、在查一下图谱,看该位点在质粒中出现了几次,工具质粒是不会同一位点出现
2
次以上的,但往往插入片段可能带有同位点。也有可能酶切不彻底。
我最近在做
双酶切
,是关于酶切的
答:
跑的这么虚。。。切出去的
条带
有多大 胶上看不到 是太小了么 倒未必没有切开 你这质粒亮度上看量挺大的 也会会往下沉一点 所以对比旁边的会更低一些 跑个对照组一般是假如出现没完全切开 有多条带的时候可以对比下知道回收哪条带 像你这只剩一条带了倒是可以回收了继续做后面的试试 ...
怎样判断
双酶切
后是否成功获得目的片段
答:
这个问题好像比较混.
酶切
切开走胶看小片段啊,如果你看到了小片段那就认为有切开但不一定是完全.如果那是那种
两个
位点之间很小,那么只能看到片段,没有切开的是超螺旋跑在前面,且一般会有两
条带
,切开的一般一条带.祝好运
对于载体的单酶切和
双酶切
,胶图分别会如何?为什么会这样啊?谢谢帮忙回 ...
答:
双酶切
一般会有3
条带
,而且正确现象应只有一个是非常亮的。因为两种酶识别
两个
位点切开,无论是质粒还是目的片段两端的粘性末端完全不同,还是拼图,内容不同,两端切合口也不同,除了一种连接方式外没有其他连接了。胶途中3条带分别为:目的片段条带,空质粒条带,最亮的重组质粒条带。
DNA
酶切
后电泳,
条带
呈复带的原因
答:
质粒的话,
双酶切
中间有几十bp以上,切出来的条带就是两条,这个你应该能判断的。如果是pcr产物酶切出现了两条极近的带,那么很有可能是因为pcr产物纯化时有杂带污染,一开始跑胶的时候看不出来,后来你回收浓缩再加上酶切,再跑电泳的时候就出现了两条极近的带。其实将这
两条带
回收(上面那条...
质粒
双酶切
后怎么会这个样子
答:
所以显的比较小:)zbq-92(站内联系TA)超螺旋的跑的最快,其次是线性的DNA,最后跑的最慢的是带缺口(即开环)的.用碱裂解法提取质粒看不到线性的带,只有其余的
两条
,但不一定是那一条亮.如果你的超螺旋那条特别亮,
酶切
后同样大小的DNA片段,由于超螺旋变为线性,电泳就会显示比超螺旋的带大.
质粒DNA
酶切
不完全是什么现象
答:
现象的话你通过跑一个琼脂糖凝胶电泳就能看出来,空载质粒完全切割的话应该只有一条带,没切开的话会有
2
-3条带,而且位置比较高。 如果是连入了目的片段的载体,那么完全切割只有
两条带
。未完全切割的话会有3-4条带左右。产生原因很多:1.可能是酶切的时间不够。2.可能是你用
双酶切
的时候buffer的...
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正常情况双酶切有几条带
质粒双酶切出现特别近
双酶切后条带一亮一暗
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双酶切条带的结果分析
双酶切成功的胶图
质粒双酶切出现几条带
为何双酶切还出现空载质粒
双质粒酶切切出3条带