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刮细胞是否需要细胞裂解液
western blot实验步骤
答:
1)制冰,准备冰盒。2)配制
细胞裂解液
:根据细胞数量确定所需裂解液:50ul/六孔板一孔 。裂解液配方:100ul碧云天裂解液+1ul蛋白酶抑制剂混合物+1ul PMSF 3)按实验需要准备好细胞:去掉培养基,1×PBS洗3次(去掉培养基中的血清),每个孔(6孔板)加入适量的裂解液。迅速用
细胞刮
刮下细胞并转移...
Western blot实验
需要
准备什么试剂和耗材
答:
-
对于贴壁细胞,去除培养液,用PBS或生理盐水洗涤细胞,然后加入裂解液
。- 用枪头吹打细胞,确保裂解液与细胞充分接触。- 刮下细胞并转移到离心管中,以14000rpm离心5分钟。- 取上清液并保存于-20°C。1.2 组织样品的处理 - 将组织样品切成小块,最好在冰上进行。- 加入裂解液,根据组织量加入适...
细胞
核
裂解液
有什么作用
答:
1. RIPA
裂解液
在
细胞
实验中用于提取核蛋白,其对蛋白质的提取效果较好。2. 将RIPA裂解液加入到细胞培养皿中,并与细胞混合摇动15分钟,之后可以
刮
取或吸出细胞内容物。3. 若进行Western blot实验,需在裂解液中加入Loading buffer,然后将混合物在95°C下煮沸10分钟,以充分变性蛋白质。裂解液的裂解作...
紧急求助微管蛋白的提取方法
答:
每瓶
细胞
加入300μl细胞低渗
裂解液
冰浴裂解20min后将
刮
取细胞,全部转移至Eppendorf管中,14,000×g室温离心10min,收集上清液,其中含有未聚合的微管蛋白;沉淀部分用与上清等体积的裂解液充分悬浮后,冰浴5min,4℃12,000×g时离心,弃去沉淀,此部分上清中即含有原来沉淀中聚合的微管蛋白。
如何收集用于western blot等的
细胞
答:
我一般这样做,用于western 1、将细胞用PBS 冲洗2遍 2、加入100ul的
细胞裂解液
3、用细胞棒迅速
刮
除细胞 4、用枪头将含有细胞悬液的裂解液移入新的EP管 5、4° 12000转 20分钟 6、不要碰到沉淀,将上清液移到新的EP 管,注意记住体积 RNA的也很简单 1、将细胞用PBS 冲洗2遍 2、加入100ul...
细胞
核
裂解液
有什么作用
答:
ripa
裂解液
对核蛋白的提取好点。加到
细胞
培养皿里面,摇15分钟,然后
刮
下来吸出来,是做western的话加Loading buffer 再95°煮10分钟。裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化,淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞...
红
细胞裂解液
的原理是什么
答:
去除红细胞最简便易行的方法之一是用裂解液裂解红细胞,它既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞。裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化,淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红
细胞裂解液
裂解得到的组织细胞中不含红细胞...
求做western blot时提取贴壁
细胞
总蛋白详细的protocol
答:
1、移除旧培养液 2、每孔加PBS1ml,漂洗1到2次 3、每孔加蛋白
裂解液
100ul(蛋白裂解液不易加多,多了会稀释蛋白浓度)4、然后用
细胞刮
棒来回刮除细胞,用枪头吸出液体至干净的EP管(操作最好在冰上,尽量吸干净)5、短暂振荡一下,置冰静置15到30分钟 6、离心:12000转,20min。离心结束后...
怎样提取干
细胞
中的蛋白?
答:
1、Trixon-100或NP-40
裂解液
裂解;2、冻融裂解法;3、研磨法;“经典的就是分子克隆2讲的,用RIPA裂解,然后
刮
下来,冰裕30min,超生,4度离心10min”(1) 单层贴壁
细胞
总蛋白的提取: 1、倒掉培养液,并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液(或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走)...
细胞
超声破碎前,需用PBS
裂解液
重悬,反复冻融,请问这里的PBS配方是什 ...
答:
PBS是磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline)一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用。它是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液,主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl,由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广;而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。PBS1L配方pH7.4:磷酸二氢钾...
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